4 ο ΕΡΓΑΣΤΗΡΙΟ ΟΡΟΔΙΑΓΝΩΣΤΙΚΗ ΤΩΝ ΛΟΙΜΩΞΕΩΝ. Αιτιολογική Διάγνωση Λοίμωξης επιτυγχάνεται: (1)Απομόνωση μικροοργανισμού (καλλιέργειες σε ζωμούς και τρυβλία,

Παρουσίαση με θέμα: "4 ο ΕΡΓΑΣΤΗΡΙΟ ΟΡΟΔΙΑΓΝΩΣΤΙΚΗ ΤΩΝ ΛΟΙΜΩΞΕΩΝ. Αιτιολογική Διάγνωση Λοίμωξης επιτυγχάνεται: (1)Απομόνωση μικροοργανισμού (καλλιέργειες σε ζωμούς και τρυβλία,"— Μεταγράφημα παρουσίασης:

1 4 ο ΕΡΓΑΣΤΗΡΙΟ ΟΡΟΔΙΑΓΝΩΣΤΙΚΗ ΤΩΝ ΛΟΙΜΩΞΕΩΝ

2 Αιτιολογική Διάγνωση Λοίμωξης επιτυγχάνεται: (1)Απομόνωση μικροοργανισμού (καλλιέργειες σε ζωμούς και τρυβλία, κυτταρικές καλλιέργειες, πειραματόζωα) (2)Έμμεση ανίχνευση μικροοργανισμού - Χρώσεις και μικροσκόπηση (3) Ανίχνευση συστατικών του μικροοργανισμού  μοριακες τεχνικες - Γενετικό υλικό  μοριακες τεχνικες - Αντιγόνα  ΑΝΟΣΟΔΙΑΓΝΩΣΤΙΚΕΣ ΤΕΧΝΙΚΕΣ (4) Ανίχνευση (κυρίως στον ορό του αρρώστου) προϊόντων της ειδικής ανοσολογικής απόκρισης κατά του παθογόνου  ΟΡΟΛΟΓΙΚΗ ΔΙΑΓΝΩΣΗ

3 ΑΝΟΣΟΔΙΑΓΝΩΣΤΙΚΕΣ ΤΕΧΝΙΚΕΣ Ανίχνευση αντισωμάτων ή αντιγόνων σε υγρά/άλλα δείγματα του αρρώστου π.χ. περιφερικό αίμα, εγκεφαλονωτιαίο υγρό (ΕΝΥ), αρθρικό υγρό, πτύελα, ούρα, κόπρανα ΟΡΟΛΟΓΙΚΗ ΔΙΑΓΝΩΣΗ Ανίχνευση αντισωμάτων στον ορό του αρρώστου Ορός Ορός: δειγματοληψία περιφερικού αίματος σε σωληνάριο  ενεργοποίηση μηχανισμών πήξης του αίματος  διαχωρισμός του αίματος σε πήγμα (έμορφα συστατικά: ερυθρά, λευκά και αιμοπετάλια) και ορό (υγρή φάση:πρωτεΐνες, λιποπρωτεΐνες, άλλα στοιχεία )

4 ΟΡΟΛΟΓΙΚΗ ΔΙΑΓΝΩΣΗ Για πρακτικούς λόγους: εξέταση μόνο της χυμικής ανοσίας Κυρίως: ανίχνευση IgG και IgM αντισωμάτων Αρχή: εφ’ όσον το ανοσοποιητικό σύστημα λειτουργεί φυσιολογικά, κάθε λοίμωξη οδηγεί στην παραγωγή ειδικών αντισωμάτων κατά του παθογόνου (αρχικά IgM και στην συνέχεια IgG)

5 ΟΡΟΛΟΓΙΚΗ ΔΙΑΓΝΩΣΗ Ο ασθενής που εμφανίζει ένα πιθανό λοιμώδες νόσημα (πυρετό εδώ και 3 εβδομάδες) πάσχει από μελιταίο πυρετό (λοίμωξη από Brucella) ??? (1) Αποκλεισμός λοίμωξης: ο ασθενής δεν έχει αντισώματα κατά της Brucella (ούτε IgM ούτε IgG) [→ ο ξενιστής δεν έχει «δει» ποτέ το παθογόνο] (2) Διάγνωση λοίμωξης στο παρελθόν: ο ασθενής έχει μόνον IgG αντισώματα κατά της Brucella (αλλά όχι IgM) [→ ο ξενιστής έχει «δει» το παθογόνο στο απώτερο παρελθόν] (3) Διάγνωση οξείας λοίμωξης: ο ασθενής έχει μόνον IgM αντισώματα κατά της Brucella (αλλά όχι IgG αντισώματα), επομένως η διάγνωσή μας είναι λοίμωξη από Brucella [→ ο ασθενής πάσχει από μελιταίο πυρετό] Άλλα παραδείγματα: λοιμώδης μονοπυρήνωση (EBV), ιός ιλαράς, πνευμονία από Legionella

6 (4) Διάγνωση ύπαρξης (προστατευτικής) ανοσίας: η έγκυος γυναίκα έχει μόνον IgG αντισώματα κατά του τοξοπλάσματος, μόνο IgG αντισώματα κατά του ιού της ερυθράς και μόνο IgG αντισώματα κατά του CMV, επομένως δεν χρειάζεται να ανησυχούμε για λοίμωξη του εμβρύου κατά την διάρκεια της εγκυμοσύνης [→ Αλλά, σε ορισμένες περιπτώσεις η ύπαρξη αντισωμάτων δεν συνεπάγεται και την ύπαρξη προστατευτικής ανοσίας (πχ ΗIV) ] (5) Παρακολούθηση ανοσολογικής απόκρισης σε εμβολιασμό: μετά τον εμβολιασμό του, ο φοιτητής της ιατρικής ανέπτυξε προστατευτικό τίτλο anti-S αντισωμάτων κατά του ιού της ηπατίτιδας B)

7 Πρακτικά: Εφαρμογή στην διάγνωση των λοιμώξεων, στις οποίες η απομόνωση του μικροοργανισμού σε καλλιέργειες είναι αδύνατη, ή δύσκολη, ή καθυστερεί Πολύ συχνή εφαρμογή στην διάγνωση των ιογενών λοιμώξεων (για την απομόνωση του παθογόνου απαιτούνται κυτταροκαλλιέργειες)

8 ΟΡΟΛΟΓΙΚΗ ΔΙΑΓΝΩΣΗ Διάγνωση Ιογενών Λοιμώξεων Εpstein-Barr virus (EBV) (αίτιο λοιμώδους μονοπυρήνωσης) Rubella virus (ερυθρά) Cytomegalovirus (CMV) Hepatitis A, B, C viruses HIV (human immunodeficiency virus) HTLV (human T-cell leukemia virus) Parvovirus B19

9

10

11

12

13

14

15

16

17

18

19 Ανοσολογικές Διαγνωστικές Τεχνικές - Ταξινόμηση Radioimmunoassays (RIA) Ανοσοενζυμικές (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA) Western Blot (ανοσοαποτύπωση) Ανοσοφθορισμός (άμεσος και έμμεσος) Συγκολλητινο-αντιδράσεις Ιζηματινο-αντιδράσεις

20 ELISA Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay

21 ELISA: ανίχνευση αντισώματος

22 ELISA: ανίχνευση αντιγόνου

23 Ορολογική Διάγνωση HIV-Λοίμωξης  Τεχνική ELISA (αρχική εξέταση, screening test)  Tεχνική Western blot (επιβεβαιωτική εξέταση, confirmatory test)

24

25

26 Αμεσος και Εμεσος Ανοσοφθορισμός

27 Αμεσος Ανοσοφθορισμός

28 Εμεσος Ανοσοφθορισμός

29 Ανίχνευση αντισώματος κατά της glycoprotein B Ανίχνευση του αντιγόνου pp65 σε πολυμορφοπύρηνα Cytomegalovirus

30 → Συγκολλητινοαντίδραση με latex

31 Aνίχνευση Methicillin Resistant Staphylococcus aureus (MRSA)

32 Ανοσοχρωματογραφία μεμβράνης

33

34

35 Ποιά είναι τα Επιθυμητά Χαρακτηριστικά των Εργαστηριακών Εξετάσεων ????????

36 Επιθυμητά Χαρακτηριστικά Εργαστηριακών Εξετάσεων 1.  Ευαισθησία και  Ειδικότητα 2.Ταχεία λήψη αποτελέσματος 3.Απλές  Δύσκολες 4.Φθηνές  Ακριβές 5.«Eυκολη λήψη» κλινικού δείγματος  «Δύσκολη»

37 Διαγνωστική Ευαισθησία Διαγνωστική Ειδικότητα Θετική Προγνωστική Αξία Αρνητική Προγνωστική Αξία

38 Διαγνωστική Ευαισθησία Συχνότητα θετικής εξέτασης όταν μία συγκεκριμένη νόσος είναι παρούσα «θετικότητα» στην νόσο Αληθώς Θετικά / [Αληθώς Θετικά + Ψευδώς Αρνητικά ]  Οι έχοντες θετική εξέταση ασθενείς (αριθμητής) στο σύνολο των ασθενών (παρονομαστής)

39 Διαγνωστική Ειδικότητα Συχνότητα αρνητικής εξέτασης όταν μία συγκεκριμένη νόσος ΔΕΝ είναι παρούσα «αρνητικότητα» στην υγεία Αληθώς Αρνητικά / [Αληθώς Αρνητικά + Ψευδώς Θετικά]  Οι έχοντες αρνητική εξέταση υγιείς (αριθμητής) στο σύνολο των υγιών (παρονομαστής)

40 Θετική Προγνωστική Αξία Ποσοστό ασθενών στο σύνολο των θετικών αποτελεσμάτων Ποσοστό αληθώς θετικών αποτελεσμάτων Αληθώς Θετικά / [Αληθώς Θετικά + Ψευδώς Θετικά]  Οι έχοντες την νόσο (αριθμητής) στο σύνολο αυτών με θετική εξέταση (παρονομαστής)

41 Αρνητική Προγνωστική Αξία Ποσοστό υγιών στο σύνολο των αρνητικών αποτελεσμάτων Ποσοστό αληθώς αρνητικών αποτελεσμάτων Αληθώς Αρνητικά / [Αληθώς Αρνητικά + Ψευδώς Αρνητικά]  Οι μη έχοντες την νόσο (αριθμητής) στο σύνολο αυτών με αρνητική εξέταση (παρονομαστής)

42 To θεώρημα του Bayes C = (DxA) / (DxA) + (1-D) (1-B) A: Ευαισθησία, B: Ειδικότητα C: Θετική Προγνωστική Αξία (ΘΠΑ) D: Συχνότητα Νόσου Η Θετική Προγνωστική Αξία μίας εξέτασης (test) δεν εξαρτάται μόνον από την Ευαισθησία και την Ειδικότητα του test, αλλά και από την Συχνότητα της Νόσου στον πληθυσμό που εξετάζεται

43 To θεώρημα του Bayes C = (DxA) / (DxA) + (1-D) (1-B) A: Ευαισθησία, B: Ειδικότητα C: Θετική Προγνωστική Αξία (ΘΠΑ) D: Συχνότητα Νόσου ΥΠΟΘΕΣΗ Τεστ διάγνωσης HIV με ELISA  Ευαισθησία 99%, Ειδικότητα 99% συχνότητα νόσου 1%: ΘΠΑ 50% συχνότητα νόσου 10%: ΘΠΑ 91% συχνότητα νόσου 20%: ΘΠΑ 96%