Καλλιέργειες Θρεπτικά υλικά Ταυτοποίηση των μικροβίων Καλλιέργειες Θρεπτικά υλικά Ταυτοποίηση των μικροβίων Μπάκα Σταυρούλα Αν. Καθηγήτρια

Σκοπός

Καλλιέργειες Τεχνητά θρεπτικά υλικά Κυτταροκαλλιέργειες Εμβρυοφόρα αβγά κότας Πειραματόζωα

Θρεπτικά υλικά - Κύρια συστατικά Πεπτόνες Εκχύλισμα κρέατος Εκχύλισμα μυκήτων Σάκχαρα Άγαρ (φυτική ουσία, λειώνει 80ο C, πήζει 30ο C) Αναγωγικές ουσίες (για αναερόβιο περιβάλλον) Εκλεκτικές ουσίες (χρωστικές, άλατα, αντιβιοτικά) Χρωματομετρικοί δείκτες (αλλάζουν χρώμα με τη μεταβολή του pH)

Θρεπτικά υλικά Υγρά Ημίρρευστα Στερεά Κοινά Ειδικά Θρεπτικός ζωμός Θρεπτικό άγαρ Πεπτονούχο σακχαρούχο νερό Ειδικά Εκλεκτικά Εμπλουτισμένα Διαχωριστικά Συντηρητικά

Θρεπτικά υλικά - Αποστείρωση Με θερμότητα: αυτόκλειστο (κλίβανος υγρής αποστείρωσης: 121ο C, 2 atm, 15-20 min) Με διήθηση Διαμοιρασμός σε τρυβλία Σπορά

Differential Culture Media and Characteristics MEDIUM IMPORTANT INGREDIENTS PURPOSE AND DIFFERENTIAL INGREDIENTS Manitol-Salt Agar (MSA) 7.5% NaCl (750g/l) Mannitol Neutral Red Purpose: Selective isolation of Staphylococcus species and preliminary identification of pathogenic species by fermentation of mannitol (pink-to-yellow color change with acid production). Inhibitor: High sodium chloride concentration inhibits many types of bacteria. Carbohydrate Source: Mannitol pH Indicator: Phenol Red Salmonella-Shigella agar (SS Agar) Bile salt (8.5g/l) Sodium citrate (8.5g/l) Brilliant green Sodium thiosulfate Ferric citrate Lactose Neutral Red Purpose: Inhibits the growth of coliform organisms & permits the growth of Salmonella & Shigella species from clinical specimens. Inhibitor: High Bile Salt concentration & Sodium Citrate inhibit all G+ bacteria and many Gram- bacteria. bacteria and many Gram- bacteria Carbohydrate Source: Lactose pH Indicator: Neutral Red Primary Isolation Media (Inhibitory). MacConkey agar (MAC) Bile salt (1.5g/l) Crystal violet Lactose Neutral Red Purpose: Recover the Enterobacteriaceae & related enteric Gram-negative bacilli. Inhibitor: Bile salt & Crystal Violet. Inhibit the growth of Gram-positive bacteria and some fastidious Gram-negative bacteria. Carbohydrate Source: Lactose pH Indicator: Neutral Red Eosin-Methylene-Blue Agar (EMB) Eosin Y Methylene-Blue Lactose Purpose: Isolation & detection of the Enterobacteriaceae or related coliform bacilli from specimens with mixed bacteria. Inhibitor: Eosin & methylene blue. Inhibits the growth of Gram-positive bacteria and some fastidious G- organisms Carbohydrate Source: Lactose pH Indicator: Eosin & methylene blue combine to form a precipitate at acidic pH.

Biohazard discard container Incubate the plate at 37oC for 24-48 hours. MATERIALS: Sterile cotton swab Bacteriological loop Nutrient Agar plates Biohazard discard container

Μακροσκοπική εμφάνιση αποικιών Μέγεθος Σχήμα Ύψος Χρώμα Περιφέρεια Σύσταση (π.χ. βλεννώδης) Όψη Μεταβολές στο θρεπτικό υλικό

Δοκιμασία καταλάσης

Δοκιμασία κοαγκουλάσης

PRESUMPTIVE TESTS FOR GROUP B STREPTOCOCCI The CAMP Test PRINCIPLE: The hemolytic activity of staphylococcal-hemolysin on RBC is enhanced by an extracellular factor produced by Group B streptococci, called the CAMP factor. Therefore, wherever the two reactants overlap in sheep BAP, an accentuation of the ß-hemolytic reaction will be noted. PROCEDURE: The CAMP test is performed by making a single streak of the streptococcus perpendicular to a strain of Staphylococcus aureus that is known to produce ß-hemolysin. The two streak lines must not touch one another. The inoculated plate must be incubated with an ambient atmosphere (room temperature). The plate should not be incubated in an anaerobic environment because many Group A streptococci are positive in the absence of O2. Positive control: S. agalactiae.

S. pyogenes – bacitracin sensitive

S. pneumoniae – optochin sensitive S. mitis – optochin resistant

Mac Conkey agar

Lipase Oxidase

Βιοχημικές δοκιμασίες

Urease Motility agar (left=immotile)

SIMPLIFIED FLOW DIAGRAM FOR GRAM-NEGATIVE RODS                                                                                                 

Θρεπτικά υλικά αναερόβιων βακτηρίων Εμπλουτιστικά Μη εκλεκτικά Εκλεκτικά Διαφοροποιητικά

Brucella Blood Agar Ζωμός (Broth)

API System

Αυτοματοποιημένα συστήματα