ΝΙΚΟΛ-ΔΗΜΗΤΡΑ ΣΑΡΑΝΤΗ 4565

Παρουσίαση με θέμα: "ΝΙΚΟΛ-ΔΗΜΗΤΡΑ ΣΑΡΑΝΤΗ 4565"— Μεταγράφημα παρουσίασης:

1 ΝΙΚΟΛ-ΔΗΜΗΤΡΑ ΣΑΡΑΝΤΗ 4565
Η ΕΠΙΔΡΑΣΗ ΑΝΤΙΟΞΕΙΔΩΤΙΚΩΝ ΚΑΙ ΟΓΚΟΓΟΝΙΔΙΩΝ ΣΤΟ ΜΕΤΑΒΟΛΙΣΜΟ ΚΥΤΤΑΡΩΝ ΠΟΥ ΕΧΟΥΝ ΑΠΟΚΟΛΛΗΘΕΙ ΑΠΟ ΤΗ ΒΑΣΙΚΗ ΜΕΜΒΡΑΝΗ – ΣΩΤΗΡΙΑ ΑΠΟ ΤΗ ΜΟΙΡΑ «ANOIKIS» ΝΙΚΟΛ-ΔΗΜΗΤΡΑ ΣΑΡΑΝΤΗ 4565 ΜΑΘΗΜΑ: ΒΙΟΤΕΧΝΟΛΟΓΙΑ ΥΠΕΥΘΥΝΟΣ: ΚΑ ΦΡΑΓΚΟΥ ΙΑΤΡΙΚΗ ΣΧΟΛΗ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΙΩΑΝΝΙΝΩΝ ΜΑΙΟΣ 2010

2 ? ΥΠΟΘΕΣΗ – Η ΑΡΧΗ ΤΗΣ ΕΡΕΥΝΑΣ ΟΓΚΟΓΟΝΙΔΙΑ ANOIKIS ΚΑΡΚΙΝΟΣ ΚΥΤΤΑΡΑ
Schafer Z., Grassian A., et al. “Antioxidant and Oncogene Rescue of Metabolic Defects caused by Loss of Matrix Attachement”. Nature 3 Sep. 2009: ΟΓΚΟΓΟΝΙΔΙΑ ΚΑΡΚΙΝΟΣ ANOIKIS ΚΥΤΤΑΡΑ ΑΝΤΙΟΞΕΙΔΩΤΙΚΑ ?

3 ANOIKIS ΚΥΤΤΑΡΑ «ΑΝΕΥ ΟΙΚΟΥ» - HOMELESS CELLS
ΚΥΤΤΑΡΑ που έχουν ΑΠΟΚΟΛΛΗΘΕΙ ΑΠΟ ΤΗ ΒΑΣΙΚΗ ΜΕΜΒΡΑΝΗ (Β.Μ) και κατά συνέπεια οδηγούνται σε Προγραμματισμένο κυτταρικό θάνατο, δηλ. ΑΠΟΠΤΩΣΗ

4 ΒΙΝΤΕΟ ΠΟΥ ΕΠΕΞΗΓΕΙ ΤΗΝ ΕΝΝΟΙΑ
ANOIKIS

5 ANOIKIS KAI ΟΓΚΟΓΟΝΙΔΙΑ
ΣΤΑΔΙΟ 1Ο ANOIKIS KAI ΟΓΚΟΓΟΝΙΔΙΑ

6 ΕΛΕΓΧΟΣ ΚΥΤΤΑΡΙΚΩΝ ΕΠΙΠΕΔΩΝ ATP ΠΡΟΣΚΟΛΛΗΜΕΝΑ ΚΑΙ ΑΠΟΚΟΛΛΗΜΕΝΑ
ΒΗΜΑ 1Ο ATPlite ASSAY ΕΛΕΓΧΟΣ ΚΥΤΤΑΡΙΚΩΝ ΕΠΙΠΕΔΩΝ ATP MCF-10A ΚΥΤΤΑΡΑ ΠΡΟΣΚΟΛΛΗΜΕΝΑ ΚΑΙ ΑΠΟΚΟΛΛΗΜΕΝΑ

7 ATPlite ASSAY

8 ΣΗΜΑΝΤΙΚΗ ΜΕΙΩΣΗ ATP ΣΕ ΚΥΤΤΑΡΑ ΑΠΟΚΟΛΛΗΜΕΝΑ ΓΙΑ 24 ΩΡΕΣ
ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑ 1Ο ATP levels (a.u) ΣΗΜΑΝΤΙΚΗ ΜΕΙΩΣΗ ATP ΣΕ ΚΥΤΤΑΡΑ ΑΠΟΚΟΛΛΗΜΕΝΑ ΓΙΑ 24 ΩΡΕΣ

9 ΣΥΜΠΕΡΑΣΜΑ 10 ATP ΚΥΤΤΑΡΑ ΑΠΟΚΟΛΛΗΜΕΝΑ = ΑΝΤΙΘΕΤΑ
Η ΕΚΦΡΑΣΗ ΤΟΥ ERBB2 ΑΠΟΤΡΕΠΕΙ ΤΗΝ ATP ΣΤΑ ΚΥΤΤΑΡΑ ΠΟΥ ΕΧΟΥΝ ΑΠΟΚΟΛΛΗΘΕΙ ΑΠΟ ΤΗ ΒΑΣΙΚΗ ΜΕΜΒΡΑΝΗ

10 ΒΗΜΑ 2Ο ΑΝΟΣΟΑΠΟΤΥΠΩΣΗ WESTERN
ΕΛΕΓΧΟΣ ΕΠΙΔΡΑΣΗΣ ERBB2 ΣΤΗΝ ΕΚΦΡΑΣΗ EGFR ΣΕ ΑΠΟΚΟΛΛΗΜΕΝΑ ΚΥΤΤΑΡΑ

11 ΑΝΟΣΟΑΠΟΤΥΠΩΣΗ WESTERN

12 ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑ 2Ο - Α ΣΤΑΘΕΡΟΠΟΙΗΣΗ ΤΟΥ EGFR
ΕΝΕΡΓΟΠΟΙΗΣΗ ERK1(MAPK3) ΚΑΙ ERK2 (MAPK1) ΕΝΕΡΓΟΠΟΙΣΗ ΜΕΤΑΒΟΛΙΚΟΥ ΜΟΝΟΠΑΤΙΟΥ PI(3)K-AKT

13 ΜΟΝΟΠΑΤΙ RAS - MAPK

14 ΜΟΝΟΠΑΤΙ RAS- MAPK

15 PI(3)K-AKT ΜΟΝΟΠΑΤΙ

16 ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑ 2Ο - Β ATP levels (a.u) Έκφραση παραλλαγών των PI(3)K και AKT επιτρέπουν τη διατήρηση υψηλών επιπέδων ATP σε αποκολλημένα κύτταρα

17 ΒΗΜΑ 3Ο ΕΛΕΓΧΟΣ ΕΠΙΠΕΔΩΝ ΓΛΥΚΟΖΗΣ ΣΕ ΑΠΟΚΟΛΛΗΜΕΝΑ ΚΑΙ ΜΗ ΚΥΤΤΑΡΑ
AMPLEX RED GLUCOSE ASSAY ΕΛΕΓΧΟΣ ΕΠΙΠΕΔΩΝ ΓΛΥΚΟΖΗΣ ΣΕ ΑΠΟΚΟΛΛΗΜΕΝΑ ΚΑΙ ΜΗ ΚΥΤΤΑΡΑ

18 + AMPLEX RED GLUCOSE ASSAY
RED AMPLEX REAGENT + REACTION BUFFER peroxidase substrate ΠΙΠΕΤΑ MICROPLATE D-GLUCOSE + GLUCOSE OXIDASE D-GLUCONOLACTONE + H2O2 H2O2 + AMPLEX RED AGENT RESORUFIN red-fluorescent oxidation product

19 ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑ 3Ο ΣΤΑ ΑΠΟΚΟΛΛΗΜΕΝΑ ΚΥΤΤΑΡΑ, ΤΟ ERBB2 ΑΠΟΤΡΕΠΕΙ ΤΗΝ
GLUCOSE UPTAKE ΣΤΑ ΑΠΟΚΟΛΛΗΜΕΝΑ ΚΥΤΤΑΡΑ, ΤΟ ERBB2 ΑΠΟΤΡΕΠΕΙ ΤΗΝ ΠΤΩΣΗ ΤΗΣ ΠΡΟΣΛΗΨΗΣ ΓΛΥΚΟΖΗΣ

20 ΔΙΑΣΩΣΗ ΚΥΤΤΑΡΟΥ – ΔΙΑΤΗΡΗΣΗ ATP
ΓΕΝΙΚΟ ΣΥΜΠΕΡΑΣΜΑ ERBB ΣΤΑΘΕΡΟΠΟΙΗΣΗ EGFR ΕRBB ΕΝΕΡΓΟΠΟΙΗΣΗ ΜΕΤΑΒΟΛΙΚΩΝ ΜΟΝΟΠΑΤΙΩΝ ERBB ΑΠΟΚΑΤΑΣΤΑΣΗ ΕΙΣΟΔΟΥ ΓΛΥΚΟΖΗΣ ΔΙΑΣΩΣΗ ΚΥΤΤΑΡΟΥ – ΔΙΑΤΗΡΗΣΗ ATP

21 ANOIKIS KAI ΑΝΤΙΟΞΕΙΔΩΤΙΚΑ

22 ? ΒΗΜΑ 1Ο ΤΑ ΕΠΙΠΕΔΑ ROS ΕΠΗΡΕΑΖΟΝΤΑΙ ΑΠΟ ΤΗΝ ΑΠΟΚΟΛΛΗΣΗ ΤΟΥ ΚΥΤΤΑΡΟΥ
ΑΠΟ ΤΗ ΒΑΣΙΚΗ ΜΕΜΒΡΑΝΗ ? ΜΕΤΡΗΣΗ ΕΠΙΠΕΔΩΝ ROS ΣΕ ΑΠΟΚΟΛΛΗΜΕΝΑ ΚΑΙ ΜΗ ΚΥΤΤΑΡΑ

23 ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑ 1Ο ΤΟ ERBB2 ΑΠΟΤΡΕΠΕΙ ΤΗΝ ΑΥΞΗΣΗ ΤΩΝ ΕΠΙΠΕΔΩΝ ROS
LEVELS (a.u) BCL2 ATTACHED DETACHED ΤΟ ERBB2 ΑΠΟΤΡΕΠΕΙ ΤΗΝ ΑΥΞΗΣΗ ΤΩΝ ΕΠΙΠΕΔΩΝ ROS ΣΤΑ ΑΠΟΚΟΛΛΗΜΕΝΑ ΚΥΤΤΑΡΑ

24 ΒΗΜΑ 2Ο ΔΡΑΣΗ DHEA ΚΑΙ 6AN ΜΕΣΩ ΕΝΕΡΓΟΠΟΙΗΣΗΣ ΤΟΥ ΔΡΟΜΟΥ
ΕΙΝΑΙ ΓΝΩΣΤΟ ΠΩΣ ΤΑ ΕΠΙΠΕΔΑ ROS ΜΠΟΡΟΥΝ ΝΑ ΜΕΙΩΘΟΥΝ ΜΕΣΩ ΕΝΕΡΓΟΠΟΙΗΣΗΣ ΤΟΥ ΔΡΟΜΟΥ ΤΩΝ ΦΩΣΦΟΡΙΚΩΝ ΠΕΝΤΟΖΩΝ (Δ.Φ.Π) ΔΡΑΣΗ DHEA ΚΑΙ 6AN ΕΛΕΓΧΟΥΜΕ ΤΗΝ ΕΠΙΔΡΑΣΗ ΤΟΥ Δ.Φ.Π ΣΤΑ ΑΠΟΚΟΛΛΗΜΕΝΑ ΚΥΤΤΑΡΑ

25 ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑ 2Ο Η ΔΡΑΣΗ ΑΝΑΣΤΟΛΕΩΝ ΤΟΥ Δ.Φ.Π. ΕΜΠΟΔΙΖΕΙ
ATP LEVELS (a.u) Η ΔΡΑΣΗ ΑΝΑΣΤΟΛΕΩΝ ΤΟΥ Δ.Φ.Π. ΕΜΠΟΔΙΖΕΙ ΤΟ ERBB2 ΝΑ ΔΙΑΤΗΡΗΣΕΙ ΤΑ ΕΠΙΠΕΔΑ ATP

26 ΓΕΝΙΚΟ ΣΥΜΠΕΡΑΣΜΑ ROS ΕΝΕΡΓΟΠΟΙΣΗ Δ.Φ.Π ERBB2 ΔΙΑΤΗΡΗΣΗ ATP
ΕΠΙΒΙΩΣΗ ΚΥΤΤΑΡΟΥ

27 ΤΑ ΑΝΤΙΟΞΕΙΔΩΤΙΚΑ ΟΔΗΓΟΥΝ ΣΕ ΥΨΗΛΑ ΕΠΙΠΕΔΑ ATP ΣΕ ΑΠΟΚΟΛΛΗΜΕΝΑ ΚΥΤΤΑΡΑ
ΕΠΙΠΛΕΟΝ ΕΛΕΓΧΟΙ ATP LEVELS (a.u) ΤΑ ΑΝΤΙΟΞΕΙΔΩΤΙΚΑ ΟΔΗΓΟΥΝ ΣΕ ΥΨΗΛΑ ΕΠΙΠΕΔΑ ATP ΣΕ ΑΠΟΚΟΛΛΗΜΕΝΑ ΚΥΤΤΑΡΑ

28 ΕΠΙΠΛΕΟΝ ΕΛΕΓΧΟΙ ΕΙΝΑΙ ΓΝΩΣΤΟ ΟΤΙ ΤΑ ΚΑΡΚΙΝΙΚΑ ΚΥΤΤΑΡΑ ΔΙΑΤΗΡΟΥΝ
ΤΟ ATP ΤΟΥΣ ΜΕΣΩ ΤΗΣ ΟΞΕΙΔΩΣΗΣ ΛΙΠΑΡΩΝ ΟΞΕΩΝ CO2 Counts ΤΑ ΑΝΤΙΟΞΕΙΔΩΤΙΚΑ ΑΥΞΑΝΟΥΝ ΤΩΝ ΑΡΙΘΜΟ ΤΩΝ ΟΞΕΙΔΩΣΕΩΝ ΛΙΠΑΡΩΝ ΟΞΕΩΝ ΚΑΙ ΕΤΣΙ ΤΟ ΚΥΤΤΑΡΟ ΤΡΟΦΟΔΟΤΕΙΤΑΙ ΜΕ ATP

29 ΓΙΑ ΤΟΥ ΛΟΓΟΥ ΤΟ ΑΛΗΘΕΣ… ΜΙΚΡΟΣΚΟΠΙΟ ΔΥΟ ΦΩΤΟΝΙΩΝ

30 ΜΙΚΡΟΣΚΟΠΙΟ ΔΥΟ ΦΩΤΟΝΙΩΝ

31 ΣΩΤΗΡΙΑ ΑΠΟ ΤΗ ΜΟΙΡΑ ΤΟΥ ANOIKIS
ΣΥΜΠΕΡΑΣΜΑΤΑ ERBB (EGFR + ΜΕΤΑΒ.ΜΟΝΟΠ.) ATP ΔΙΑΣΩΣΗ ΚΥΤΤΑΡΟΥ ΑΝΤΙΟΞΕΙΔΩΤΙΚΑ (ΜΕΙΩΣΗ ROS + Δ.Φ.Π) FAO ATP ΔΙΑΣΩΣΗ ΚΥΤΤΑΡΟΥ ΣΩΤΗΡΙΑ ΑΠΟ ΤΗ ΜΟΙΡΑ ΤΟΥ ANOIKIS

32 ANOIKIS ΚΑΙ ΚΑΡΚΙΝΟΣ

33 ΦΥΣΙΟΛΟΓΙΚΑ ΚΥΤΤΑΡΑ ΑΔΥΝΑΜΙΑ ΠΡΟΣΛΗΨΗΣ ΓΛΥΚΟΖΗΣ ΑΥΞΗΣΗ ROS ΑΣΙΤΙΑ –
ΑΠΟΚΟΛΛΗΣΗ Β.Μ (ANOIKIS) ΑΔΥΝΑΜΙΑ ΠΡΟΣΛΗΨΗΣ ΓΛΥΚΟΖΗΣ ΑΥΞΗΣΗ ROS ΑΣΙΤΙΑ – ΕΛΛΕΙΨΗ ATP ΟΞΕΙΔΩΤΙΚΟ ΣΤΡΕΣ ΑΠΟΠΤΩΣΗ

34 ΚΑΡΚΙΝΙΚΑ ΚΥΤΤΑΡΑ ΠΑΘΟΛΟΓΙΚΑ ΚΥΤΤΑΡΑ ΥΠΕΡΕΚΦΡΑΣΗ ΑΠΟΚΟΛΛΗΣΗ Β.Μ ERBB2
ΕΝΕΡΓΟΠΟΙΗΣΗ PI(3)K/AKT RAS-MAPK ΜΟΝΟΠΑΤΙΩΝ ΠΡΟΣΛΗΨΗ ΓΛΥΚΟΖΗΣ ΜΕΤΑΣΤΑΣΗ ΕΠΙΒΙΩΣΗ

35 BINTEO ΠΟΥ ΠΑΡΟΥΣΙΑΖΕΙ ΤΩΝ ΚΑΡΚΙΝΙΚΩΝ ΚΥΤΤΑΡΩΝ
ΤΟ ΜΟΝΤΕΛΟ ΔΡΑΣΗΣ ΤΩΝ ΚΑΡΚΙΝΙΚΩΝ ΚΥΤΤΑΡΩΝ

36 ΕΡΩΤΗΜΑΤΑ ΠΟΥ ΑΝΑΚΥΠΤΟΥΝ ΔΙΤΤΗ
ΕΙΝΑΙ ΣΩΣΤΟ ΝΑ ΧΟΡΗΓΟΥΜΕ ΑΝΤΙΟΞΕΙΔΩΤΙΚΑ ΓΙΑ ΤΗΝ ΚΑΤΑΠΟΛΕΜΗΣΗ ΤΟΥ ΚΑΡΚΙΝΟΥ ? ΔΡΑΣΗ ΑΝΤΙΟΞΕΙΔΩΤΙΚΩΝ ΔΙΤΤΗ ΚΑΤΑΠΟΛΕΜΗΣΗ ΚΑΡΚΙΝΟΓΕΝΕΣΗΣ ΟΧΙ ΟΞΕΙΔΩΤΙΚΗ ΚΑΤΑΣΤΡΟΦΗ DNA ΠΡΟΑΓΩΓΗ ΚΑΡΚΙΝΟΓΕΝΕΣΗΣ ΕΠΙΒΙΩΣΗ ΚΥΤΤΑΡΩΝ ΜΕ ΔΙΑΤΑΡ. ΜΕΤΑΒΟΛΙΣΜΟ

37 ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΑ Schafer Z., Grassian A., et al. “Antioxidant and Oncogene Rescue of Metabolic Defects caused by Loss of Matrix Attachement”. Nature 3 Sep. 2009: Berg J., Tymoczko J. and Lubert Stryer. Biochemistry, 5th Edition. New York: W.H. Freeman & Co., 2002 Lodish, Berk et al. Molecular Cell Biology, 5th Edition. New York: W.H. Freeman & CO., 2003

38 ΕΥΧΑΡΙΣΤΩ